6ª PRÁCTICA

18/10/19
PRÁCTICA Nº6: "COLORANTE WRIGHT"

PRINCIPIO DEL MÉTODO
Los colorantes tipo Romanowsky están formados por Azul de Metileno y sus derivados oxidados, colorantes básicos, y el colorante ácido Eosina.
Los colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos, gránulos en neutrófilos y proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura mas o menos intenso, mientras que la eosina se une a la hemoglobina, componentes básicos de las estructuras celulares y los gránulos de los eosinófilos.
El balance entre el azul de metileno y sus derivados oxidados y entre estos y la Eosina, proporciona una tonalidad más o menos azul y una mayor o menor intensidad en la coloración, que son característicos de cada tipo de colorante Giemsa, May-Grünwald o Wright.

OBJETIVO

• Visualizar la morfología de las células sanguíneas y así poder identificarlas y diferenciarlas.

UTILIDAD
Se emplea para la tinción de células sanguíneas y de médula ósea.

REACTIVO

• Wright.

COMPOSICIÓN

• Eosina-azul de metileno según Wright: 2'5 g/L.
• Metanol: 1L.

PRECAUCIONES
A causa del contenido en metanol, el colorante es tóxico e inflamable. Se aconseja consultar las fichas de datos de seguridad antes de su uso.
La eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa legal vigente.
La manipulación de las muestras y del reactivo debe hacerse con las debidas precauciones aplicando las directrices de seguridad del laboratorio.

MUESTRA

• Extensión sanguínea realizada con sangre capilar.

MATERIAL NECESARIO

• Cubeta de tinción.
• 2 paralelas sobre la cubeta de tinción.
• Frascos de agua destilada.
• NaCl 0'%.
• Microscopio óptico y aceite de inmersión.

TÉCNICA

1. En primer lugar, se coloca el portaobjetos que contiene la única extensión sanguínea sin teñir sobre las barras paralelas de la cubeta de tinción.
2. Cubrir totalmente el porta con Wright que se deja actuar durante 5 minutos.
3. Depositar sobre el porta unas gotas de NaCl 0'9% soplando ligeramente con la pipeta para conseguir una mezcla homogénea.
4. Después de 5 minutos, se lava con agua destilada y se deja secar a temperatura ambiente.

RESULTADOS
- Examen microscópico 10X:

  - Examen microscópico 40X:

 - Examen microscópico 100X:

- Eritrocitos: Color rosa o rosa - anaranjado.
- Plaquetas: Color violeta pálido o púrpura.
- Neutrófilos: Núcleo violeta oscuro. Citoplasma rosado con granulaciones rojo violeta.
- Eosinófilos: Núcleo violeta. Citoplasma azul con gránulos rojos o rojo anaranjado.
- Basófilos: Núcleo azul oscuro o púrpura. Gránulos púrpura casi negros.
- Linfocitos: Núcleo púrpura. Citoplasma azul celeste.
- Monocitos: Núcleo laxo violeta. Citoplasma azul celeste.

OBSERVACIONES

• Con los resultados de esta tinción, se pueden identificar muy bien las diferentes células sanguíneas por el color que presentan sus núcleos, citroplasma, ...
• Son los mejores resultados obtenidos en comparación con los otros dos métodos de tinción, ya que se puede visualizar la morfología de cada célula perfectamente.

NOTAS
La metódica de tinción indicada es la utilizada de rutina en nuestros laboratorios.
Cada usuario puede aplicar las diversas variantes de este procedimiento, tanto manual como automático, que se ajuste a su metódica estándar. La intensidad de la coloración es proporcional al tiempo de tinción.
Para obtener resultados óptimos el colorante debe preservarse de la humedad.
Para los procesos de lavado se recomienda utilizar agua tamponada en lugar de agua corriente. Esta tiene un pH y un contenido en sales variables que, junto con concentraciones elevadas de cloro, pueden alterar los resultados de la tinción y dar lugar a resultados no consistentes.