8ª PRÁCTICA

22/11/19
PRÁCTICA Nº8: "DETERMINACIÓN CELULAR DE LOS GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh EN TUBO"

OBJETIVOS

• Determinar los grupos sanguíneos del sistema ABO.
• Determinar el Rh (Ag D).
• Observar la presencia de aglutinación en el tubo.

MATERIAL NECESARIO

• Gradilla, parafilm, tubo de hemólisis y 6 tubos de ensayo de 5 mL cada uno.
• Pipeta Pasteur y dispensador de suero fisiológico (SF).
• Micropipeta automática de 100-1000 microlitros y puntas de plástico desechables.
• Centrífuga y visualizador.
  

REACTIVOS

• SF.
• Anti-A.
• Anti-B.
• Anti-AB (actúa como control).
• Anti-D.
• Autocontrol Rh.
  

MUESTRA

• Sangre anticoagulada con EDTA.

APARATOS

• Baño termostático.
• Centrífuga.
• Visualizador.

PRECAUCIONES

• Termostatar los reactivos a temperatura ambiente durante unos minutos antes de su utilización.
• Esperar 2 minutos para comprobar las posibles reacciones débiles.
• Es conveniente realizar un lavado de hematíes para evitar interferencias que puedan ocasionar falsos resultados.
• En el caso de que el tubo para la determinación del Ag D dé resultado negativo en un primer momento, incubar durante 15 minutos en el baño María y volver a observar la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador.
• Expresar los resultados del sistema Rh con letras para que no haya confusiones.

PROCEDIMIENTOS
PROCEDIMIENTO 1: LAVADO DE HEMATÍES

1. Poner en un tubo de ensayo de 5 mL, 0'5 mL de sangre-problema.
   
2. Llenar hasta arriba de SF y tapar con un tapón para tubos de ensayo.
   
3. Agitar para que se mezcle bien la sangre con el SF.
4. Centrifugar durante 5 minutos a 2.500 rpm.
5. Extraer el sobrenadante con una pipeta Pasteur.
   
6. Repetir los 3 pasos anteriores 2 veces más.

PROCEDIMIENTO 2: REALIZACIÓN DE UNA DILUCIÓN DE HEMATÍES AL 5%

1. Del sedimento de hematíes obtenido del último lavado y centrifugación, coger una micropipeta de 100 microlitros de hematíes y depositarlos en un tubo pequeño.
2. Añadir 1'9 mL (= 1900 microlitros) de SF.

PROCEDIMIENTO 3: DETERMINACIÓN CELULAR DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh

1. Rotular 5 tubos pequeños con A, B, AB, D y CD.
   
2. Depositar en cada uno de ellos 3 o 4 gotas de la dilución de hematíes al 5%.
3. Añadir 3 o 4 gotas de suero anti-A, anti-B, anti-AB, anti-D y autocontrol Rh en sus tubos correspondientes.
   
4. Agitar cada uno de los tubos para que se mezclen bien los reactivos con los hematíes.
5. Esperar 2 minutos para observar las reacciones de aglutinación resultantes.
6. Colocar cada uno de los tubos sobre el visualizador y observar la presencia o ausencia de aglutinación.
   
   
   
   

RESULTADOS
LECTURA DE RESULTADOS
Observación de la aglutinación en el tubo: se debe golpear suavemente el tubo en el fondo con los dedos índice y medio para despegar los hematíes y observar mejor la aglutinación:

• Presencia de aglutinación (+): se forman grumos de color rojo en un líquido claro.
• Ausencia de aglutinación (-): los hematíes se resuspenden homogéneamente al golpear el fondo del tubo.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS FINALES DE LA DETERMINACIÓN REALIZADA Y VALORACIÓN
- Grupo sanguíneo: 0+.

REACTIVO	AGLUTINACIÓN EN TUBO
Anti-A	-
Anti-B	-
Anti-AB	-
Anti-D	+
Autocontrol Rh	-