5ª PRÁCTICA

18/10/19
PRÁCTICA Nº5: "MAY-GRüNWALD-GIEMSA"

PRINCIPIO DEL MÉTODO
Los colorantes tipo Romanowsky están formados por Azul de Metileno y sus derivados oxidados, colorantes básicos, y el colorante ácido Eosina. Los colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos, gránulos en basófilos y proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura más o menos intenso.
La Eosina se une a la hemoglobina, a los componentes básicos de las estructuras celulares y a los gránulos de los eosinófilos.
El balance entre el azul de metileno y sus derivados oxidados y entre estos y la Eosina, proporciona una tonalidad más o menos azul y una mayor o menor intensidad en la coloración, que son característicos de cada tipo de colorante Giemsa, May-Grünwald o Wright.

UTILIDAD
Para la tinción de células sanguíneas y de médula ósea.
Algunos autores utilizan la coloración compuesta de May-Grünwald-Giemsa para la tinción de parásitos en sangre.

OBJETIVO

• Teñir una extensión sanguínea con este colorante para poder visualizar e identificar las diferentes células sanguíneas que contiene, así como su morfología.

MATERIAL NECESARIO

• 3 portaobjetos de la práctica de frotis sanguíneos.
• Cubeta de tinción.
• 2 barras paralelas situadas sobre la cubeta de tinción.
• Frascos de agua destilada.
• Microscopio óptico y aceite de inmersión.
• Probeta de 100 mL para preparar el giemsa diluido.
• Pipeta Pasteur para enrasar.
• Solución Salina Fisiológica (SSF).

 REACTIVO

• May - Grünwald.

COMPOSICIÓN
- Eosina-azul de metileno.
- Metanol.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Almacenados a temperatura ambiente (15 - 25º C), los reactivos permanecerán estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Evitar el frío excesivo que puede provocar la precipitación del colorante.

MUESTRA

• Frotis sanguíneo de sangre capilar realizado en la práctica de "frotis sanguíneos".

PREPARACIÓN DEL GIEMSA DILUIDO

• 90 mL Solución Salina Fisiológica.
• 10 mL Giemsa.

PROCEDIMIENTO

1. En primer lugar, situar el portaobjetos que vayamos a teñir sobre las paralelas encima de la cubeta de tinción.
2. Añadir 4 gotas del colorante May-Grünwald sobre el portaobjetos de cada uno.
3. El colorante, se deja actuar durante 3 minutos sobre la extensión sanguínea seca.
4. A continuación, vertir el colorante a la cubeta de tinción inclinando el portaobjetos para eliminar el exceso del colorante y, sin lavar, se cubre la extensión sanguínea con Giemsa diluido al 1/10 durante 10 minutos.
5. Una vez transcurrido este tiempo, lavar los portas de cada uno del grupo con agua destilada.
6. Se dejan secar a temperatura ambiente.
7. Observar al microscopio óptico el próximo día de clase.

RESULTADOS
- Examen microscópico 10X (Cabeza):

 - Examen microscópico 40X (Cabeza):

 - Examen microscópico 100X:

 CAUSA-ERROR:

• En esta tinción, las células sanguíneas no pueden visualizarse claramente debido a algún error que hayamos cometido en el proceso de tinción, como puede ser: tiempo inadecuado del colorante, lavado, ...

OBSERVACIONES

• Esta práctica la hemos realizado todos los componentes del grupo al mismo tiempo, es decir, hemos contado los tiempos de los colorantes a la vez para hacerlo todos en el menor tiempo posible.