4ª PRÁCTICA

14/10/19
PRÁCTICA Nº4: "PANOPTICO RÁPIDO"

PRINCIPIO
Los colorantes Panóptico Rápido constituyen un sistema de tinción diferencial de los elementos formes de la sangre, que combina la policromía y calidad de los métodos clásicos (May Grünwald, Giemsa) con una gran rapidez de ejecución (tan solo 15 segundos).

OBJETIVO

• Teñir las diferentes células sanguíneas del frotis sanguíneo para identificarlas y visualizar su morfología.

MATERIAL NECESARIO

• Frotis sanguíneos realizados en la práctica anterior.
• Pinzas metálicas.
• 3 cubetas Wertheim.
• Papel de filtro.
• Agua.
• Microscopio óptico y aceite de inmersión. 

REACTIVOS

• A. Panóptico Rápido Nº1:
•  Composición: Disolución metanólica de colorante de triarilmetano.  

• B. Panóptico Rápido Nº2:
• Composición: Disolución acuosa tamponada de xanteno.

• C. Panóptico Rápido Nº3:
• Composición: Disolución acuosa tamponada de colorantes derivados de
  la tiazina.

REACTIVO DE TRABAJO
Todos los reactivos están listos para su uso.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Almacenados a temperatura ambiente (15-25ºC), los reactivos permanecerán
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

PRECAUCIONES

• Los productos son para uso profesional. Todos los reactivos deben manipularse con precaución por personal técnico formado. Se aconseja consultar antes de su uso la ficha de datos de seguridad.
• El colorante nº 1 es una disolución metanólica y por tanto es inflamable y tóxico por ingestión e inhalación.
• La manipulación y eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa legal vigente.

MUESTRA

• Frotis sanguíneo realizado en la práctica anterior.

TÉCNICA

1. En primer lugar, disponer de los colorantes, Nº1, Nº2, y Nº3, en cubetas Wertheim o similares.
2. Coger el portaobjetos con el frotis sanguíneo con unas pinzas y sumergir el porta en el colorante Nº1,  5 veces seguidas.
3. Secar el portaobjetos dando con él unos golpecitos suaves sobre el papel de filtro.
4. A continuación, sumegir el porta con el frotis sanguíneo en el colorante nº2 otras 5 veces seguidas.
5. Eliminar el exceso de colorante del portaobjetos dando unos golpecitos con éste en posición vertical sobre el papel de filtro.
6. Por último, volver a sumergir el porta en la cubeta nº3, 5 veces.
   
7. Eliminar el exceso de colorante sobre el papel de filtro.
8. Lavar el porta bajo el agua del grifo.
9. Dejar secar a temperatura ambiente.
10. Observar con el microscopio óptico empleando los objetivos de 10X, 40X y 100X (aceite de inmersión).

RESULTADOS

- Examen microscópico 10X (Realizada en el cuerpo de la extensión sanguínea):

- Examen microscópico 40X (Cabeza):

- Examen microscópico 100X:

                                                              Monocitos y Plaquetas

                                                            Neutrófilos segmentados

                                               Plaquetas, basófilos y neutrófilo segmentado

- Eritrocitos: Color rosa pálido o intenso.
- Plaquetas: Color violeta pálido o púrpura.
- Neutrófilos: Núcleo azul oscuro. Citoplasma rosado con granulaciones rojo violeta.
- Eosinófilos: Núcleo azul. Citoplasma azul, con gránulos rojos o rojo anaranjado.
- Basófilos: Núcleo azul oscuro. Gránulos púrpura casi negros.
- Linfocitos: Núcleo violeta. Citoplasma azul celeste.
- Monocitos: Núcleo laxo violeta. Citoplasma azul celeste.

NOTAS

• La intensidad de la tinción puede variarse, modificando el número de inmersiones en los colorantes Nº 2 y Nº 3 según se desee destacar las tonalidades rosas o las azules.
• Las cubetas que contengan los colorantes, especialmente la del colorante Nº 1, deberán guardarse tapadas, a fin de evitar una evaporación excesiva, que podría inducir a desviaciones de color respecto a las tinciones habituales.
• Antes de agotar el contenido de una cubeta, ir adicionando nueva cantidad de disolución colorante para mantener, día a día, un nivel apropiado. De vez en cuando renovar todo el contenido.